本书是高职高专“十一五”规划教材★生物技术系列之一。它力求简明扼要、内容新颖、图文并茂，既重视基础性和科学性，又适应高职高专发展方向，力争使实验内容具有先进性、系统性和综合性。实验内容包括动物、植物和微生物等多种样品中生物大分子的制备和分析，内容全面合理，反映了现代生物技术的成果和发展的特点，以期使学生系统掌握生物技术实验的基本理论和基本技能，通过实验掌握实验设计、实验条件优化和实验操作等基本科研技能，培养学生分析问题解决问题的能力。为学生学习后续的专业课及以后的工作和深造提供了良好的基础。

本书是高职高专“十一五”规划教材★生物技术系列之一。本书共分为四部分。第一部分为基因工程技术，重点介绍外源基因在大肠杆菌中的克隆与表达，由9个实验组成。第二部分是生物大分子的分离纯化及活性检测，包括大肠杆菌中表达的外源蛋白的分离纯化与检测(7个实验)、动物血中超氧化物歧化酶提取、纯化与活性鉴定(5个实验)两章。第三部分是细胞工程及检测技术，分为鸡胚成纤维细胞培养技术(9个实验)、卵清蛋白多克隆抗体的制备与检测(6个实验)、原生质体的分离、融合与杂交细胞的筛选(7个实验)三章。第四部分是发酵工程与酶工程，分为谷氨酸发酵生产技术(9个实验)、实验室啤酒发酵技术(13个实验)、淀粉酶的发酵生产(9个实验)三章。各学校可根据条件和培养方向选用。

本书可供高职高专生物技术类各专业学生使用，也可作为相关领域技术人员的参考书。

第一篇 基因工程技术

 第一章 外源基因在大肠杆菌中的克隆与表达2

实验一 大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存2

实验二 大肠杆菌基因组DNA的提取3

实验三 PCR扩增制备目的基因5

实验四 质粒DNA提取8

实验五 质粒DNA和目的基因的酶切和连接10

实验六 琼脂糖凝胶电泳检测、回收目的基因13

实验七 感受态细胞的制备和重组子转化14

实验八 转化克隆的筛选和鉴定16

实验九 外源基因的诱导表达18

第二篇 生物大分子的分离纯化及活性检测

 第二章 大肠杆菌中表达的外源蛋白的分离纯化与检测21

实验一 小量表达及细胞破碎21

实验二 表达蛋白的SDSPAGE电泳分析23

实验三 包涵体的洗涤、溶解、复性25

实验四 从包涵体中纯化表达蛋白28

实验五 固化Ni2＋吸收光谱纯化histag表达蛋白30

实验六 Western blotting免疫印迹检测表达蛋白32

实验七 碱性磷酸酶(AP)米氏常数(Km)的测定34

 第三章 动物血中超氧化物歧化酶的提取、纯化与活性鉴定38

实验一 原材料的预处理38

实验二 超氧化物歧化酶的活性测定39

实验三 粗酶液的制备41

实验四 金属螯合色谱分离纯化超氧化物歧化酶42

实验五 离子交换色谱纯化超氧化物歧化酶43

第三篇 细胞工程及检测技术

 第四章 鸡胚成纤维细胞培养技术48

实验一 实验器材的清洗48

实验二 实验器材的包装和消毒50

实验三 培养用液的配制和无菌处理51

实验四 鸡胚成纤维细胞的原代细胞培养54

实验五 细胞克隆和纯化57

实验六 细胞的传代培养59

实验七 细胞生长曲线的测定60

实验八 细胞的冻存和复苏61

实验九 动物细胞融合63

 第五章 卵清蛋白多克隆抗体的制备与检测65

实验一 实验动物的抓取、固定和注射方法65

实验二 实验动物的处死与取血方法68

实验三 实验动物的免疫方法70

实验四 抗血清的制备72

实验五 双向琼脂扩散实验检测抗体效价73

实验六 间接ELISA法检测抗体75

 第六章 植物原生质体的分离、融合与杂交细胞的筛选78

实验一 培养基母液的配制78

实验二 培养基的配制与灭菌80

实验三 愈伤组织的诱导与培养83

实验四 原生质体的制备84

实验五 原生质体的活力测定87

实验六 原生质体的融合88

实验七 杂交细胞的筛选90

第四篇 发酵工程与酶工程

 第七章 谷氨酸发酵生产技术94

实验一 谷氨酸菌种的制备94

实验二 噬菌体的检测95

实验三 大肠杆菌谷氨酸脱羧酶酶粉的制备96

实验四 发酵过程中还原糖的测定97

实验五 发酵过程中谷氨酸含量的测定99

实验六 谷氨酸发酵液的除菌体101

实验七 谷氨酸的离子交换回收102

实验八 谷氨酸的等电回收及精制103

实验九 谷氨酸钠质量控制及分析106

 第八章 实验室啤酒发酵技术108

实验一 啤酒酵母的纯种分离108

实验二 啤酒酵母的计数110

实验三 啤酒酵母的质量检查111

实验四 啤酒酵母的扩大培养115

实验五 麦芽汁的制备116

实验六 麦芽汁糖度的测定120

实验七 啤酒主发酵123

实验八 总还原糖含量的测定125

实验九 α-氨基氮含量的测定127

实验十 酸度和pH的测定129

实验十一 酒精度的测定及原麦芽汁浓度的计算131

实验十二 色度和苦味物质含量的测定135

实验十三 二氧化碳含量的测定137

 第九章 淀粉酶的发酵生产139

实验一 淀粉酶产生菌的分离、筛选与鉴定139

实验二 发酵条件优化及酶学性质研究143

实验三 淀粉酶产生菌的改良146

实验四 淀粉酶的发酵生产148

实验五 淀粉酶活力的测定150

实验六 盐析处理和透析152

实验七 离子交换剂的色谱处理154

实验八 浓缩和冷冻干燥155

实验九 淀粉酶的包埋处理及热稳定性测定157

参考文献160