当前，利用昆虫病原真菌控制农业有害昆虫，实施生物控制和病虫害综合治理（IPM）是造就绿色环境的重要途径之一。全书共六章，分别介绍农业害虫病原真菌概况、反向遗传学研究基础、基因功能的生物信息学分析、僵菌微管蛋白和MAPPT1蛋白的基因功能研究实例，详细介绍了反向遗传学在农业害虫病原真菌中的应用。

张杰，1975年5月生，河南太康县人，汉族，博士研究生学历，生物学专业。现为周口师范学院生命科学与农学学院专职教师，从事昆虫病原真菌微生物研究。在国内外期刊上微生物领域发表相关论文30多篇。

第一章 导论
1.1 研究背景
1.2 研究现状
1.2.1 真菌侵染过程的研究
1.2.2 真菌产生代谢物的研究
1.2.3 侵染后的宿主防御研究
1.2.4 相互作用的三级程度研究
1.2.5 被侵染的昆虫致死性行为变化研究
1.2.6 昆虫病原菌的传播方式研究
1.2.7 昆虫宿主-病原菌模型的遗传多样性研究现状
1.2.8 昆虫病原真菌的流行病学研究
1.2.9 建模
1.2.10 控制潜力
1.2.11 毒力基因与非毒力基因
1.3 研究技术路线
第二章 基因功能的实验研究过程
2.1 载体结构
2.2 质粒的扩大培养与提取（以天根质粒提取试剂盒为例）
2.3 质粒酶切
2.4 回收酶切质粒（OMEGA凝胶回收试剂盒）
2.5 目的基因的寻找与电子PCR
2.6 酶切位点分析
2.7 引物设计和接头添加
2.8 PCR扩增
2.9 上样电泳
2.10 PCR产物回收
2.11 酶切质粒回收物和PCR纯化产物的连接
2.12 感受态大肠杆菌转化
2.13 阳性克隆鉴定
2.14 靶基因的下游片段重组
2.15 重组完整的质粒电转到农杆菌
2.16 农杆菌侵染目标真菌
2.17 真菌转化子培养与PCR验证
2.17.1 真菌转化子培养与PCR验证过程
2.17.2 微量DNA提取试剂配方
2.18 真菌转化子的Southern Blotting杂交验证
2.18.1 真菌基因组DNA提取
2.18.2 Southern Blotting杂交操作
第三章 基因功能的生物信息学研究
3.1 Motif的分析与再现
3.1.1 序列下载
3.1.2 Motif分析
3.1.3 Motif分析再现
3.1.4 MEME的应用
3.2 Motif的批量分析方法
3.2.1 文件准备
3.2.2 导入数据与设置
3.2.3 细节调整与文件保存
3.2.4 空间位置大小调节
3.2.5 文本设置
3.2.6 其他
3.3 多基因组比对和共线性分析Mauve软件
3.4 蛋白质三维结构预测（SWISS-MODEL）
3.5 同源性分析—进化树构建
3.5.1 Mega软件构建进化树
3.5.2 clustalx与Mega联合构建进化树
3.5.3 在线比对与Mega联合构建进化树
3.5.4 构建系统发育树需要注意的问题
3.5.5 系统发育树的美化
3.6 小RNA分析方法
3.6.1 数据下载
3.6.2 mRNA差异表达
3.6.3 lncRNA差异表达
3.6.4 miRNA差异表达
3.6.5 ceRNA网络构建
3.7 基因编码蛋白的二级结构预测
3.7.1 PSIPRED Workbench在线预测
3.7.2 COILS在线预测卷曲结构
3.7.3 Jpred4在线预测
3.7.4 scratch.proteomics在线预测
3.7.5 Predict Protein在线预测
3.7.6 信号肽的在线预测
3.8 蛋白质的物理化学性质预测
3.9 基因的模体识别与解析
3.10 蛋白结构的可视化
3.11 基因的富集信号通路分析
3.12 分子对接分析
3.12.1 分子对接的基础
3.12.2 Chimera软件分子对接过程
3.12.3 分子对接细节展示
3.12.4 分子对接结果平面化
3.13 蛋白活性口袋的预测
3.14 antiSMASH数据库—微生物次生代谢物合成基因簇查询和预测
3.15 蛋白的多级构比对分析
3.16 Circos在线绘图
第四章 蝗绿僵菌微管蛋白（β-tubulin）基因的功能
4.1 研究背景
4.2 研究的内容
4.3 实验材料
4.3.1 主要仪器设备
4.3.2 主要试剂和培养基
4.4 实验方法
4.4.1 菌株和培养条件
4.4.2 生物信息学分析
4.4.3 真菌基因组DNA和RNA提取
4.4.4 荧光染色及观察
4.4.5 Southern blotting
4.4.6 载体构建及转化子的获得
4.4.7 孢子和虫菌体的计数
4.4.8 产孢量的测定
4.4.9 昆虫生测
4.4.10 PCR扩增程序和条件
4.4.11 数据处理
4.5 结果分析
4.5.1 蝗绿僵菌β-tubulin基因的生物信息学分析
4.5.2 蝗绿僵菌目标基因β-tubulin基因敲除和回复转化子的验证
4.5.3 蝗绿僵菌β-tubulin基因对菌落形态和菌丝形态的影响
4.5.4 蝗绿僵菌β-tubulin基因对毒力的影响
4.5.5 蝗绿僵菌β-tubulin基因对产孢的影响
4.5.6 蝗绿僵菌β-tubulin基因对侵染结构附着胞的影响
4.5.7 蝗绿僵菌β-tubulin基因在细胞核事件中的功能
4.6 讨论
第五章 蝗绿僵菌MaPpt1负调控微循环产孢和紫外抗性
5.1 研究背景
5.2 研究内容和技术路线
5.2.1 研究内容
5.2.2 研究技术路线
5.3 实验材料
5.3.1 主要仪器设备
5.3.2 主要试剂和培养基
5.4 实验方法
5.4.1 菌株和培养条件
5.4.2 生物信息学分析
5.4.3 真菌基因组DNA和RNA提取
5.4.4 荧光染色及观察
5.4.5 Southern blotting
5.4.6 载体构建及转化子的获得
5.4.7 孢子和虫菌体的计数
5.4.8 产孢量的测定
5.4.9 昆虫生测
5.4.10 RNA的提取和定量分析