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书名 | 分子生物学实验技术 |
分类 | 科学技术-自然科学-生物科学 |
作者 | |
出版社 | 科学出版社 |
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简介 | 内容推荐 分子生物学技术发展迅速,使得在分子水平解析生命现象、生命本质成为可能。《分子生物学实验技术》聚焦新近分子生物学技术进展编写而成。《分子生物学实验技术》包括七章:第一章CRISPR/Cas9技术,包括基因编辑的概述、小向导RNA(sgRNA)的克隆与鉴定;第二章基因转录调控分析,包括启动子分析、转录因子鉴定及表观遗传调控;第三章非编码RNA分析,涉及非编码RNA的生物信息分析及功能分析;第四章单细胞技术,简述单细胞技术的原理及其应用;第五章蛋白质-蛋白质相互作用分析,包括蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)数据库和常用的检测PPI的方法;第六章定点诱变与蛋白质翻译后修饰,重点介绍聚合酶链反应(PCR)介导的快速定点诱变、蛋白质小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)化位点鉴定以及蛋白质泛素化的检测方法;第七章基本生物信息在线工具的使用,包括基因表达总览(Gene Expression Omnibus,GEO)、注释、可视化和整合发现数据库(Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery,DAVID)、细胞景观(cytoscape)、STRING和enrichr等。 作者简介 吕立夏,同济大学医学院生物化学与分子生物学系教授,医学博士,博士生导师,中国生物化学与分子生物学会基础医学专业分会委员,教育部临床医学专业认证工作委员会成员,来华留学生临床医学专业本科教育(英语授课)质量认证项目技术专家。从事生物化学与分子生物学教学24年,国家级一流本科线上一流课程“生物化学”负责人、上海市留学生全英文示范课程“Cellular Biochemistry”负责人,主编教材5部。研究方向为神经视网膜病变的机制研究和干预,以第一作者/通讯作者/共同通讯作者发表SCI收录文章30余篇,授权发明专利14项。 目录 第一章 CRISPR/Cas9技术 概述 实验1-1 小向导RNA(sgRNA)设计与载体构建 实验1-2 重组质粒的转化和单克隆筛选鉴定 实验1-3 重组质粒抽提和鉴定 实验1-4 细胞转染及阳性克隆鉴定 实验1-5 基因编辑效率检测 实验1-6 逆转录定量PCR(RT-qPCR)检测目标基因表达 实验1-7 蛋白质印迹法(Western blotting)检测目标蛋白的表达 第二章 基因转录调控分析 概述 实验2-1 双萤光素酶报告基因检测 实验2-2 染色质免疫沉淀PCR(ChIP-PCR) 实验2-3 染色质免疫沉淀测序(ChIP-seq) 实验2-4 靶标的切割和标记(CUT&Tag)实验 实验2-5 甲醛辅助鉴定调控元件技术 实验2-6 单细胞ATAC-seq 实验2-7 重亚硫酸盐全基因组甲基化测序 第三章 非编码RNA分析 概述 实验3-1 长非编码RNA(lncRNA)靶基因预测及功能分析 实验3-2 利用在线工具对某一环状RNA(circRNA)进行初步分析 实验3-3 circRNA的RT-qPCR检测 实验3-4 circRNA过表达及验证 第四章 单细胞技术 概述 实验4-1 视网膜单细胞悬液制备 第五章 蛋白质-蛋白质相互作用分析 概述 实验5-1 酵母双杂交 实验5-2 拉下(pull-down)实验 实验5-3 免疫共沉淀 实验5-4 荧光共振能量转移 第六章 定点诱变与蛋白质翻译后修饰 概述 实验6-1 PCR介导的快速定点诱变 实验6-2 蛋白质小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)化位点鉴定 实验6-3 蛋白质泛素化检测——变性免疫沉淀法 实验6-4 蛋白质泛素化检测——镍NTA亲和层析法 实验6-5 蛋白质泛素化检测——体内TUBEs法 实验6-6 蛋白质泛素化检测——体外检测法 第七章 基本生物信息在线工具的使用 概述 实验7-1 GEO数据下载及差异基因分析 实验7-2 利用在线工具对差异基因进行聚类分析 实验7-3 蛋白质相互作用网络的构建和hub基因筛选 |
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