这本由德国K.M. 阿恩特和K.M. 米勒编著的《现代蛋白质工程实验指南》在理论上从蛋白质工程中的设计计算策略和进化策略出发,讨论了采用计算方法的组合式蛋白质设计策略及蛋白质进化库的设计与筛选,并且介绍了一个行之有效的基于极性与非极性氨基酸的二元组图进行蛋白质设计的方法细节。在实践上本书详细介绍了蛋白质中非天然氨基酸的整体掺人方法;作为理性设计实例列举了基于钙调素与荧光蛋白融合的钙指示剂;人工锌指蛋白的设计与合成,以及基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟等。在定向进化方法的应用方面,介绍了噬菌体展示技术、核糖体失活展示系统、利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化、简并寡核苷酸基因混编,以及其他酶的定向进化新方法。
现代蛋白质工程是将分子生物学、蛋白质结构与功能分析、理论计算,以及生物化学有机结合的学科,其目标是快速及高效率地发展和改进实用的或有价值的蛋白质。这本由德国K.M. 阿恩特和K.M. 米勒编著的《现代蛋白质工程实验指南》分为两个部分,第一部分主要介绍了蛋白质理性设计的策略,包括理论计算方法,利用一些很有说服力的例证说明所设计蛋白质的全新特性,阐述了如何设计具有目标特性的蛋白质,并选择了很多如蛋白质一蛋白质相互作用、DNA结合、抗体模拟,以及酶活性设计等具体实例;第二部分蛋白质的定向进化技术主要介绍了包括进化库设计的一般方法、进化库质量的统计评估、核酸混编的新方法,以及不同的选择筛选策略等。同时也给出了不同特性体外定向进化的一些实例,如蛋白质折叠类型、折叠热稳定性以及酶活性等。
《现代蛋白质工程实验指南》适合蛋白质科学各个层次的科研工作者,特别是从事相关领域研究的高年级大学生及研究生参考使用。
目录
译者序
前言
原作者及其单位
第一部分 蛋白质工程中的设计与计算策略
1 采用计算方法的组合式蛋白质设计策略
2 大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入
3 盘绕螺旋结构的设计和优化技巧
4 基于钙调素与荧光蛋白融合的钙指示剂
5 人造锌指蛋白的设计和合成
6 独体——基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟
7 位点特异性核酸内切酶的蛋白质工程
第二部分 蛋白质工程中的进化策略
8 蛋白质库的设计和筛选——概率计算
9 基于极性与非极性氨基酸的“二元组图”进行蛋白质设计
10 利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化
11 简并寡核苷酸基因混编
12 M13噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用
13 核糖体失活展示系统
14 分隔式自我复制:聚合酶和其他酶的定向进化的一个新方法
15 Raf蛋白Ras结合结构域的简并进化库合成以及利用片段互补法快速筛选二氢叶酸还原酶的快速折叠且稳定的克隆
16 应用末端截切、进化、再延长技术提高酶稳定性的方法
索引