生物技术的飞速发展，使生命科学成为当代自然科学的热点和重点，培养具有现代生物技术实验技能的人才是高等学校的重要任务。

为了帮助学生更深刻地理解生物技术领域的基本概念和原理，培养他们分析问题和解决问题的实际能力，特编写这本实验技术教材。本教材是各位编者结合自己的教学和研究实践并参考相关资料编写而成，可作为生物学相关专业学生的实验教材，也可作为其他相关专业教学科研人员的参考书。

上篇生物技术原理

第一章 基因工程技术

第一节 克隆载体

第二节 重组DNA技术

第三节 基因文库的构建

第四节 PcR技术

第五节 核酸分子杂交技术

第六节 DNA测序技术

第七节 转基因技术

第二章 蛋白质及酶工程技术

第一节 蛋白质的提取与粗分级

第二节 蛋白质的细分级

第三节 蛋白质的鉴定

第四节 蛋白质结构测定

第五节 定点突变技术

第六节 蛋白质的原核和真核表达技术

第七节 酶工程(酶蛋白工程)概述

第三章 细胞工程技术

第一节 植物细胞工程技术

第二节 动物细胞工程技术

第四章 发酵工程技术

第一节 微生物发酵方式

第二节 发酵过程

第五章 其他常用技术

第一节 功能基因的克隆技术

第二节 基因表达分析技术

第三节 RNA干扰(RNAi)技术

第四节 双向电泳技术

第五节 毛细管电泳技术

第六节 酵母双杂交技术

下篇基本实验

第六章 基因工程实验

实验一 碱裂解法提取质粒DNA

实验二 DNA酶切及琼脂糖凝胶电泳

实验三 大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒DNA的转化

实验四 PCR扩增DNA特异性片段

实验五 真核生物基因组DNA的提取

实验六 植物组织总RNA的提取及变性电泳

实验七 Nonthem杂交

实验八 基因组文库的构建

实验九 CDNA文库的构建

实验十 动物转基因技术——动物细胞的磷酸钙沉淀转化法

实验十一 植物转基因技术——农杆菌介导的花芽浸泡法转化拟南芥植株

实验十二 植物转基因技术——农杆菌介导的双子叶植物叶盘转化法

第七章 蛋白质及酶工程实验

实验一 生物组织总蛋白质的提取

实验二 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

实验三 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(sDs—PAGE)

测定蛋白质亚基分子量

实验四 大肠杆菌中重组蛋白质的诱导表达与亲和层：纯化

实验五 蛋白质的免疫印迹分析

实验六 Edman降解法测定小肽的氨基酸序列

实验七 蛋白质结晶

实验八 酶的基本特性

实验九 绿色荧光蛋白(GFP)定点突变

第八章 细胞工程实验

实验一 Ms培养基母液的配制

实验二 培养基的配制与灭菌

实验三 植物培养材料的灭菌与接种

实验四 种胚的离体培养

实验五 愈伤组织的诱导

实验六 悬浮细胞系的建立

实验七 植物原生质体的游离和融合

实验八 草莓遗传转化实验(农杆菌介导法)

实验九 水稻悬浮细胞的遗传转化实验

(基因枪法)

实验十 动物组织的消化培养及单细胞的获得

第九章 发酵工程实验

实验一 凝固型酸奶的制作

实验二 纤维素酶生产(一)——固体发酵法生产

纤维素酶

实验三 纤维素酶生产(二)——分级盐析法纯化

纤维素酶

实验四 纤维素酶生产(三)——凝胶过滤层析法纯4

纤维素酶

实验五 四环素发酵代谢曲线的绘制

第十章 综合设计实验

实验一 溶菌酶的纯化、结晶与酶活测定

实验二 种子蛋白质含量及组成分析

实验三 植物蛋白酶的分离纯化与鉴定

实验四 绿色荧光蛋白的原核表达、纯化及鉴定

实验五 转绿色荧光蛋白基因烟草的获得及鉴定

实验六 大肠杆菌碱性磷酸酶定点诱变与酶活

分析

附录

附录一 实验室规则

附录二 实验室安全及防护

附录三 常用仪器的使用

附录四 常用因特网网址

附录五 常用缓冲溶液及试剂的配制

附录六 常用实验数据