本书是一本以实验开发为基础的指导性书籍，以一种大肠杆菌热不稳定的内毒素亚基(LTB)为典型材料，系统具体地介绍了其研究中所采用的分子生物学方法和蛋白质化学方法，包括基因重组、克隆、筛选、表达及蛋白质的分离纯化及鉴定等。本书主要以实验操作步骤的形式，系统全面地介绍常用的研究方法和手段，但在每个实验前都有简练的理论说明，使理论和实践相结合。通过本书的学习，可以使读者将当前的分子生物学和生物化学实验技术作为一个整体进行掌握。 本书适合于生物学、生物化学、微生物学和生物医药专业本科生、研究生的实验参考书，同时对于正在学习化学、化工、动物学、植物学的读者希望提高实验技能也很有帮助。

 引言和背景

第一部分 分子生物学

 实验一

微量移液器使用指南

 实验二

质粒DNA模板的制备

 实验三

(1)测定质粒DNA浓度

(2)PCR扩增质粒DNA的LTB基因

 实验四

(1)琼脂糖凝胶电泳

(2)PCR产物回收

 实验五

(1)限制性内切酶酶切LTB插入基因和载体

(2)平板制备

 实验六

(1)琼脂糖凝胶电泳法纯化酶切后的插入基因片段和载体

(2)酶切后插入基因片段和载体的回收

 实验七

(1)DNA浓度测定

(2)插入基因与载体的连接

 实验八

重组体转化宿主细胞

 实验九

(1)挑取菌落，PCR检测插入片段

(2)用可能的重组子划线平板

(3)接种培养物／PCR反应／分离质粒

 实验十

(1)琼脂糖凝胶电泳检测插入基因

(2)用质粒少量制备试剂盒纯化pET28LTB

 实验十一

(1)DNA浓度检测

(2)乙醇沉淀质粒DNA 

(3)测序反应

 实验十二

(1)纯化延伸反应产物

(2)测序凝胶示范

 实验十三一

(1)分析序列数据

(2)验证插入序列

 实验十四

(1)基因表达一

(2)表达宿主的转化

 实验十五

诱导LTB基因表达：测定最大表达的时间

第二部分蛋白质化学

 实验十六

(1)SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析诱导时间过程

(2)用Western blot将蛋白质转移至膜上 

 实验十七

western Blot的显像

 实验十八

大规模培养物的制备

 实验十九

亲和层析法分离LTB

 实验二十

(1)柱层析分段物的SDS_PAGE鉴定

(2)免疫印迹检验LTB的存在

 实验二十一

蛋白质浓缩和结晶

 实验二十二

准备ELISA微量滴定板来分析系列神经苷脂配体

 实验二十三

用ELISA分析系列神经节苷脂配体

 实验二十四

蛋白质结构测定：X射线衍射技术

 实验二十五

用X射线衍射分析蛋白质晶体的特征(可任选) 

 实验二十六

引物设计

索引